Crioconservación de semen de dorada Brycon moorei con dimetilsulfóxido

El objetivo fue evaluar la calidad del semen descongelado de dorada Brycon moorei crioconservado con dimetilsulfóxido (DMSO) a tres porcentajes de inclusión. El semen se obtuvo de nueve machos mantenidos en cautiverio en la Estación Piscícola Repelón (Atlántico, Col), inducidos con extracto pituitario de carpa (4,5 mg/kg). El semen fue diluido en proporción 1:3 con un diluyente compuesto de DMSO a tres porcentajes 5%, 10% y 15%; glucosa al 6% y yema de huevo al 12%; empacado en macrotubos de 2,5 ml, congelados en vapores de nitrógeno y después de tres meses descongelados a 35°C durante 90 s. Semen fresco fue considerando como tratamiento control. En semen descongelado se evaluó movilidad total, tipos de movilidades, progresividad, velocidades y concentración espermática con el programa Sperm Class Analyzer SCA®; adicionalmente en semen fresco se determinó volumen, color y tiempo de activación. El semen fresco presentó movilidad mayor a 80% y tiempo de activación entre 28,5 y 41 s; mientras que, la concentración espermática osciló entre 10188,1 y 14590,2 millones/ml. La movilidad total del semen descongelado fue mayor cuando DMSO se incluyó a 5% (40,1±5,0%) o 10% (43,3±8,7%) (p0,05); pero a 15% registró la menor movilidad (30,6±7,9%) y el mayor porcentaje de espermatozoides inmóviles (69.4±7.9%) (p0,05); lo cual sugiere que inclusiones de DMSO por encima de 10% ocasionan mayores daños al espermatozoide de dorada. Los resultados permiten concluir que DMSO debe ser incluido entre 5 y 10%, junto con glucosa al 6% y yema de huevo al 12% para crioconservar semen de dorada.The aim was assess thawed sperm quality of dorada Brycon moorei, cryopreserved with dimethylsulfoxide (DMSO) to three inclusion rate. The sperm was obtained from nine males, kept in captivity in the Repelón Fish Farming Station (Atlántico, Col), were induced with carp pituitary extract (4.5 mg/kg). The semen was diluted with an extender composed of DMSO to three inclusion rates (5%, 10% and 15%); 6% glucose and 12% egg yolk. The sperm was diluted in 1:3, packed in macrotubes of 2.5 mL and freeze with vapors of nitrogen and after three months were thawed at 35°C for 90 s. The fresh sperm was considered as control treatment. The thawed semen was analyzed total motility, types of motility, progressivity, velocities and sperm concentration with the Sperm Class Analyzer SCA® software; further, volume, color and activation time were measured in fresh semen. The fresh sperm showed motility greater than 80% and activation time between 28.5 and 41 s; whereas that sperm concentration ranged between 10188.1 and 14590.2 million/ml. The total motility of thawed sperm was higher when DMSO was included at 5% (40.1±5.0%) or DMSO 10% (43.3±8.7%) (p 0.05); but with 15% DMSO, were registered the low motility (30.6±7.9%) and the highest percentage of immotile sperm (69.4±7.9%) (p0.05); which suggests inclusions of DMSO above 10% cause greater damage to dorada spermatozoa. The results showed that DMSO should be included between 5 and 10%, along with 6% glucose and 12% egg yolk for cryopreservation of dorada sperm

Crioconservación de semen de dorada Brycon sinuensis con diferentes crioprotectores a dos porcentajes de inclusión

El objetivo del estudio fue evaluar la criopreservación de semen de dorada Brycon sinuensis con dimetilsulfóxido (DMSO), dimetilacetamida (DMA) o etilenglicol (EG) a dos porcentajes de inclusión (5 o 10%); para lo cual se indujeron 12 machos con 5 mg extracto hipofisario de carpa por Kg de peso y seis horas después el semen fue colectado en tubos Falcón de 20 ml. El semen fue diluido (1:4) en la solución crioprotectora compuesta por glucosa 6%, yema de huevo 12% y DMSO o DMA o EG a dos porcentajes de inclusión (5 o 10%); luego fue empacado en pajillas de 2.5 mL y congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) durante 30 minutos y posteriormente almacenadas en NL en termos de 34 L. El semen fue descongelado por inmersión directa en baño serológico a 35°C durante 60 segundos. La calidad del semen fresco, precongelado y descongelado fue evaluada con la ayuda del software Sperm Class Analyzer (SCA, Microptic, España) y un microscopio de contraste de fase (Nikon E55, Japón) mediante la movilidad total, tipos de movilidad (rápida, media, lenta), espermatozoides inmóviles, velocidades (lineal y curvilínea), progresividad total y concentración espermática. Además, en el semen descongelado, se evaluaron los daños en membrana espermática (D-Mem), en mitocondria (D-Mit) y fragmentación de DNA (F-DNA) mediante citometría de flujo (Citómetros FACS CANTO II, BD Biosciences San José, CA y LSR 2 FORTESSA) (BD Biosciences San José, CA). El semen fresco presentó alta movilidad total (97.07.0%); mientras que en semen precongelado (82.517.9%) y descongelado (45.413.6%) fue mayor cuando fue tratado con DMSO10% (p0.05). Los resultados del presente estudio permiten concluir que DMSO incluido a 5 o 10%, registró mejor calidad del semen descongelado al compararlo con los obtenidos con DMA y EG; sin embargo, la capacidad fecundante del semen criopreservado con esta solución crioprotectora (DMSO 5 o 10%, yema de huevo 12% y glucosa 6%) debe ser evaluada mediante pruebas de fertilidad y eclosión.1. INTRODUCCIÓN 142. OBJETIVOS 172.1. OBJETIVO GENERAL 172.2. OBJETIVO ESPECÍFICO 173. HIPÓTESIS 183.1. HIPÓTESIS NULA (H0) 183.2. HIPÓTESIS ALTERNATIVA (H1) 184. MARCO TEÓRICO 194.1. BIOECOLOGÍA DE DORADA Brycon sinuensis 194.2. CRIOCONSERVACIÓN DE SEMEN DE PECES 204.2.1. Crioprotectores 234.3. EVALUACIÓN DE LA CALIDAD ESPERMÁTICA 244.3.1. Movilidad espermática 254.3.2. Daño en membrana espermática y mitocondrias 264.3.3. Fragmentación del DNA 274.3.3. Fragmentación del DNA 275. METODOLOGÍA 285.1. LOCALIZACIÓN Y DESCRIPCIÓN DEL ÁREA DEL ESTUDIO 285.2. MATERIAL BIOLÓGICO 285.3. OBTENCIÓN DEL SEMEN Y EVALUACIÓN SEMINAL 295.4. TRATAMIENTOS 295.5. CRIOPRESERVACIÓN DEL SEMEN 305.5.1. Empacado y congelación 305.5.2. Descongelación del semen 315.6. CALIDAD SEMINAL 315.6.1. Volumen seminal 315.6.2. Concentración espermática 315.6.3. Tiempo de activación 325.6.4. Movilidad total, tipos de movilidad, velocidades y progresividad espermática 325.7. EVALUACIÓN DE DAÑOS POR CITOMETRÍA DE FLUJO 325.7.1. Daño en la membrana espermática y mitocondrias 325.7.2. Fragmentación del DNA 335.8. DISEÑO EXPERIMENTAL Y ANALISIS ESTADÍSTICO 346. RESULTADOS 356.1. CARACTERÍSTICAS DEL SEMEN DE DORADA 356.2. CALIDAD DEL SEMEN PRECONGELADO 356.3. CALIDAD DEL SEMEN DESCONGELADO 376.4. DAÑO CELULAR EN SEMEN DESCONGELADO 396.4.1. Daño en mitocondrias 396.4.2. Daño en membrana espermática 406.4.3. Fragmentación del DNA 406.5. EFECTO DE FACTORES EVALUADOS Y SU INTERACCIÓN 417. DISCUSIÓN 438. CONCLUSIONES 539. BIBLIOGRAFÍA 54MaestríaMagíster en Ciencias AmbientalesTrabajos de Investigación y/o Extensió